重組腸激酶
2019/8/7 11:58:25
重組腸激酶
EC: 3.4.21.9
儲存溫度：-20℃或以下
來源：重組牛腸激酶，大腸桿菌表達
蛋白序列：氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致。
1.產品簡介
雅心重組牛腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段。該酶經HPLC純化，純度高，特異性高，不含其他蛋白酶。腸激酶可以切割含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸（DDDDK）。可以在較寬pH范圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內有效切割融合蛋白。腸激酶可去除位于蛋白質N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標簽。
2.產品特性
單位定義：1U定義為在25℃，12h~16h之內，將0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。
3.推薦使用方法
1）25℃酶切條件：
按照酶活性定義，酶切條件舉例：
25mM Tris-HCl 8.0體系中：
融合蛋白 0.1-1mg/ml（蛋白總量50-100μg）
重組EK 0.1-0.2U
25℃過夜酶切，或完全酶切需16-24h，用SDS-PAGE
檢測酶切效果。
2）4℃低溫酶切條件：
4℃能對底物進行有效酶切，但需要將酶切時間延長至48-64h，或增加2-3倍酶量。
3）酶切優化和放大
優化：可以對酶切條件進行優化，例如緩沖液pH，融合蛋白濃度，EK的量，以及酶切時間，使融合蛋白能在穩定條件下被酶切，用SDS-PAGE檢測酶切效果。
放大：選擇優化后的反應條件，按該條件等比例放大，用SDS-PAGE檢測酶切效果。
4）去除重組腸激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制劑親和層析（例如sigma T0637）去除重組腸激酶。
5）注意：不建議37℃條件下酶切，可能會有非特異性酶切出現。
4.常見影響腸激酶活性的因素
在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影響。可參照以下推薦方法進行酶切：
1）為獲得理想酶切結果，請將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中，再進行酶切。
2）若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即1U酶切500μg蛋白）。
3）如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當增加酶量或延長酶切時間，也可達到較好酶切效果。
5.儲存和運輸穩定性
酶液儲存穩定性：-20℃，24個月穩定；25℃，一周內，無活性損失。緩沖體系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250mM NaCl，2mMCa2+，50%甘油。
酶液反復凍融穩定性：反復凍融5次，無活性損失。
運輸穩定性：藍冰保溫運輸，穩定。
6.產品優勢
特異性：特定的蛋白酶，切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸 (DDDDK)。
純度高：不含其他蛋白酶，無非特異性切割。
無動物源性：重組生產，無外源性的病毒污染，生產過程不使用任何動物源原料。
質量穩定：批量生產，可保證穩定連續的批次生產；產品批次間無差異，質量穩定。
符合法規要求：生產設備和生產環境符合相關法規要求，生產過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質量體系并符合GMP指導原則。
質量文件完整：按客戶需求，可提供相關法規支持文件。
7.相關產品
重組羧肽酶B；
序列分析純胰蛋白酶；
重組人胰蛋白酶；
重組抑肽酶。
EC: 3.4.21.9
儲存溫度：-20℃或以下
來源：重組牛腸激酶，大腸桿菌表達
蛋白序列：氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致。
1.產品簡介
雅心重組牛腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段。該酶經HPLC純化，純度高，特異性高，不含其他蛋白酶。腸激酶可以切割含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸（DDDDK）。可以在較寬pH范圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內有效切割融合蛋白。腸激酶可去除位于蛋白質N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標簽。
2.產品特性
| 來源 | 重組大腸桿菌 |
| 外觀 | 澄清、無色至淡黃色液體 |
| 活性 | ≥ 5.0 U/μl |
| 純度（蛋白電泳） | 單一主條帶 |
| 電泳（分子量） | 25.8 ±2.6kDa |
3.推薦使用方法
1）25℃酶切條件：
按照酶活性定義，酶切條件舉例：
25mM Tris-HCl 8.0體系中：
融合蛋白 0.1-1mg/ml（蛋白總量50-100μg）
重組EK 0.1-0.2U
25℃過夜酶切，或完全酶切需16-24h，用SDS-PAGE
檢測酶切效果。
2）4℃低溫酶切條件：
4℃能對底物進行有效酶切，但需要將酶切時間延長至48-64h，或增加2-3倍酶量。
3）酶切優化和放大
優化：可以對酶切條件進行優化，例如緩沖液pH，融合蛋白濃度，EK的量，以及酶切時間，使融合蛋白能在穩定條件下被酶切，用SDS-PAGE檢測酶切效果。
放大：選擇優化后的反應條件，按該條件等比例放大，用SDS-PAGE檢測酶切效果。
4）去除重組腸激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制劑親和層析（例如sigma T0637）去除重組腸激酶。
5）注意：不建議37℃條件下酶切，可能會有非特異性酶切出現。
4.常見影響腸激酶活性的因素
在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影響。可參照以下推薦方法進行酶切：
1）為獲得理想酶切結果，請將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中，再進行酶切。
2）若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即1U酶切500μg蛋白）。
3）如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當增加酶量或延長酶切時間，也可達到較好酶切效果。
5.儲存和運輸穩定性
酶液儲存穩定性：-20℃，24個月穩定；25℃，一周內，無活性損失。緩沖體系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250mM NaCl，2mMCa2+，50%甘油。
酶液反復凍融穩定性：反復凍融5次，無活性損失。
運輸穩定性：藍冰保溫運輸，穩定。
6.產品優勢
特異性：特定的蛋白酶，切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸 (DDDDK)。
純度高：不含其他蛋白酶，無非特異性切割。
無動物源性：重組生產，無外源性的病毒污染，生產過程不使用任何動物源原料。
質量穩定：批量生產，可保證穩定連續的批次生產；產品批次間無差異，質量穩定。
符合法規要求：生產設備和生產環境符合相關法規要求，生產過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質量體系并符合GMP指導原則。
質量文件完整：按客戶需求，可提供相關法規支持文件。
7.相關產品
重組羧肽酶B；
序列分析純胰蛋白酶；
重組人胰蛋白酶；
重組抑肽酶。
